Das zirkulierende 25-Hydroxyvitamin D (25-OH-D) ist weithin als der beste Indikator für den Vitamin-D-Status anerkannt. Die beiden wichtigsten Vitamin-D-Metaboliten im Blutkreislauf sind 25-OH Vitamin D3 und 25-OH Vitamin D2. 25-OH-D3 wird hauptsächlich aus Vitamin D3 gewonnen, das durch Sonnenlicht in der Haut produziert wird, während 25-OH-D2 aus Pflanzen in der Ernährung gewonnen wird. Derzeit gibt es zwei Haupttypen von Methoden, die routinemäßig zur Messung von 25-OH-D verwendet werden: Methoden, die auf einer chromatographischen Trennung mit anschließendem nicht-immunologischen Direktnachweis basieren, und kompetitive Immunoassays. Die meisten Immunoassays beruhen auf einem Antikörper, der sowohl 25-OH-Vitamin D2 als auch 25-OH-Vitamin D3 gemeinsam nachweisen kann und Gesamtergebnisse liefert. Der Anteil des 25-OHD2-Nachweises ist jedoch unterschiedlich.
Derzeit gibt es zwei nicht-immunologische Methoden für den direkten Nachweis: Hochdruck-Flüssigkeitschromatographie (HPLC) und Flüssigchromatographie-Tandem-Massenspektrometrie (LC-MS/ MS). Mit chromatographischen Methoden können 25-OH-D2 und 25-OH-D3 unabhängig voneinander mit ausgezeichneter Genauigkeit und Empfindlichkeit gemessen werden.
Andererseits gibt es viele wissenschaftliche Studien und Abhandlungen, die zeigen, dass die Messung des Gesamtvitamin D mit handelsüblichen Immunoassays ungenau ist, wenn die Metaboliten von Vitamin D2 und Vitamin D3 nicht getrennt und einzeln gemessen werden. Es wird empfohlen, dass jeder 25-OH-D-Test in klinischen Labors sowohl 25-OH-D2 als auch 25-OH-D3 gleichermaßen messen sollte, um einen Gesamt-25-OH-D-Wert zu ermitteln. Die untersuchten Immunoassays messen das gesamte 25-OH-D (sowohl 25-OH-D3 als auch 25-OH-D2), aber die Kreuzreaktion mit 25-OH-D2 und 25-OH-D3 variiert bei den verschiedenen Methoden zwischen 52 und 100 %.
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