Reagenzkit / als Lösung 63 series

für Echtzeit-PCRNukleinsäurePhosphat

Messungen des mRNA-Expressionsniveaus - sei es durch Northern-Analyse, Ribonuklease-Schutz oder quantitative Echtzeit-PCR - werden in der Regel durch Vergleich der Daten mit denen eines internen oder endogenen Referenzgens standardisiert. Am häufigsten werden Housekeeping-Gene wie Beta-Actin und Glyceraldehyd-3-Phosphat-Dehydrogenase (GAPDH) verwendet, da man davon ausgeht, dass ihre Expressionswerte unter verschiedenen Behandlungsbedingungen konstant bleiben. Leider ist diese Annahme nicht immer zutreffend, und Ergebnisse, die nur auf Hauskeeping-Genen basieren, können verzerrt sein (Suzuki, Higgins und Crawford 2000). Eine bessere Methode ist die Normalisierung Ihrer Daten mit unserer qPCR Human Reference cDNA, der einzigen cDNA-Kontrolle, die vollständig aus menschlichem Gewebe stammt. die qPCR Human Reference cDNA ist die ideale Kontrolle für den Vergleich von Daten aus verschiedenen quantitativen PCR-Experimenten (qPCR). Da sie aus einem Gesamt-RNA-Pool hergestellt wird, der aus verschiedenen Geweben stammt, bietet unsere qPCR Human Reference cDNA eine breite Genabdeckung, wie die Microarray-Analyse des RNA-Ausgangsmaterials zeigt. RNA und damit cDNA, die aus ganzen Geweben hergestellt wurde, bietet eine bessere Genrepräsentation mit weniger Variation als RNA aus Zelllinien (Daten nicht gezeigt). Außerdem zeigt die PCR-Analyse, dass unsere Gesamt-RNA praktisch frei von genomischer DNA ist. Dies ermöglicht eine genauere Messung der Transkriptkopienzahl. Sowohl Gene mit hoher als auch mit geringer Abundanz sind gut vertreten, was die Herstellung eines breiten Spektrums seriell verdünnter Standards für jeden qPCR-Assay ermöglicht. Da die RNA-Quelle in industriellem Maßstab hergestellt wird, sind die Schwankungen zwischen den einzelnen Chargen der Referenz-cDNA minimal.