Der Schnelltest umfasst ein einfaches Zwei-Reagenzien-Additionsprotokoll
Das Substrat reagiert direkt mit H2O2; HRP als Kopplungsenzym ist nicht erforderlich
Übersicht
Der ROS-Glo™ H₂O₂ Assay ist ein homogener, schneller und empfindlicher Biolumineszenz-Assay, der den Gehalt an Wasserstoffperoxid (H₂O₂), einer reaktiven Sauerstoffspezies (ROS), direkt in Zellkulturen oder in definierten Enzymreaktionen misst. Ein derivatisiertes Luciferin-Substrat wird mit der Probe inkubiert und reagiert direkt mit H₂O₂, um einen Luciferin-Vorläufer zu erzeugen. Die Zugabe von ROS-Glo™-Detektionslösung wandelt die Vorstufe in Luciferin um und liefert Ultra-Glo™ Recombinant Luciferase, um ein Lichtsignal zu erzeugen, das proportional zum Gehalt an H₂O₂ in der Probe ist.
Das H₂O₂-Substrat reagiert direkt mit H₂O₂, um den Luciferin-Vorläufer zu erzeugen. Die ROS-Glo™ Substrate Detection Solution wandelt den Luciferin-Vorläufer in Luciferin um und stellt außerdem die Ultra-Glo™ Luciferase zur Lichterzeugung bereit. Das Lichtsignal ist proportional zur Menge an H₂O₂ in der Probenvertiefung.
Überblick über das ROS-Glo™ H₂O₂-Assay-Protokoll für zellbasierte oder biochemische Nachweise
Der Assay folgt einem einfachen Zwei-Reagenzien-Additionsprotokoll, das keine Probenmanipulation erfordert. Das ROS-Glo™ H₂O₂-Substrat kann mit der Behandlung oder am Ende der Inkubationszeit in die Testvertiefungen gegeben werden, und die Daten können in weniger als 2 Stunden nach Zugabe des Reagenzes aufgezeichnet werden.
Enzymatische oder zellbasierte Assays in 96- und 384-Well-Plattenformaten durchführen
Die Behandlung von K562-Zellen mit Menadion führte zu einem konzentrationsabhängigen ROS-Anstieg, der mit dem ROS-Glo™ H₂O₂-Assay nachgewiesen wurde.
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