Testkit für die medizinische Forschung CellTiter-Fluor™

Lebensfähigkeit der ZellenZytotoxizitätProtease

Multiplex mit vielen anderen Lumineszenz-Assays Die Normalisierung der Daten auf die Anzahl der lebenden Zellen ermöglicht eine bessere Vergleichbarkeit der Ergebnisse mit anderen Daten Wie der Assay funktioniert Der CellTiter-Fluor™ Cell Viability Assay ist ein nicht-lytischer Fluoreszenztest mit einfacher Reagenzaddition, der die relative Anzahl lebensfähiger Zellen in einer Population misst. Der Assay basiert auf der Messung einer konservierten und konstitutiven Proteaseaktivität in lebenden Zellen und dient daher als Biomarker für die Lebensfähigkeit von Zellen. Die Proteaseaktivität in lebenden Zellen ist auf intakte lebensfähige Zellen beschränkt und wird mit einem fluorogenen, zellpermeablen Peptidsubstrat (Gly-Phe-AFC) gemessen. Das Substrat dringt in intakte Zellen ein, wo es von der Lebendzellproteaseaktivität gespalten wird und ein Fluoreszenzsignal erzeugt, das proportional zur Anzahl der lebenden Zellen ist. Die Lebendzellprotease wird bei Verlust der Membranintegrität und Austritt in das umgebende Kulturmedium inaktiv. Multiplexing mit dem CellTiter-Fluor™ Assay Der CellTiter-Fluor™ Assay kann auch in einem sequenziellen Single-Well-Multiplex-Format mit anderen nachgeschalteten Assay-Chemien verwendet werden, um die Daten anhand der Zellzahl zu normalisieren. Die Daten aus dem Assay können als interne Kontrolle dienen und ermöglichen die Identifizierung von Fehlern, die durch Zellverklumpung oder Zytotoxizität von Substanzen entstehen. In den Beispieldaten auf der rechten Seite wirken Ionomycin und PMA zusammen, um die NFAT-abhängige Genexpression zu stimulieren; eine höhere Konzentration von Ionomycin führt jedoch zu einer verringerten Expression. Durch gleichzeitige Überwachung der Lebensfähigkeit mit dem CellTiter-Fluor™ Assay wird gezeigt, dass der Rückgang der Expression auf eine Abnahme der lebensfähigen Zellen zurückzuführen ist.