Isolierung von Plasmid-DNA mit niedrigem Endotoxingehalt (<1EU/µg) aus bis zu 5 ml Bakterienkulturen mit Spin-Mini-Säulen
Übersicht
Plasmide, die mit herkömmlichen Reinigungsverfahren isoliert werden, enthalten in der Regel hohe Mengen an Endotoxinen (auch bekannt als Lipopolysaccharide oder LPS), die die nachfolgenden Transfektionsexperimente erheblich stören können. Für Plasmide mit hoher Kopienzahl können bis zu 5 mL und für Plasmide mit niedriger Kopienzahl bis zu 10 mL der Übernachtkulturen verwendet werden.
Das E.Z.N.A.® Endo-Free Plasmid Mini Kit I integriert einen effizienten Endotoxin-Entfernungsschritt in das Plasmid-Reinigungsverfahren, um qualitativ hochwertiges Transfektionsplasmid (<0,1 EU/µg) für eine effiziente Transfektion herzustellen. Die Bakterienzellen werden mit der alkalischen SDS-Lysemethode lysiert. Das gereinigte Zelllysat wird dann mit ETR-Reagenz behandelt, um die Endotoxine effizient zu entfernen. Nach Einstellung der Bindungsbedingungen wird das Zelllysat auf die HiBind®-DNA-Säule aufgetragen und die gereinigte DNA von der Säulenmembran eluiert.
Schnell - 30 Minuten oder weniger
Sicher - keine Phenol/Chloroform-Extraktionen
Vielseitig - Spin- und Vakuumformate verfügbar
Hochwertig - Endotoxine werden effizient reduziert (<0,1 EU/µg)
Spezifikationen
MERKMALE - SPEZIFIKATIONEN
Nachgeschaltete Anwendung - Empfindliche Transfektion von Zelllinien; Gentherapie usw.
Ausgangsmaterial - 1-5 mL LB-Kultur mit OD600 zwischen 2 und 3; oder gleichwertig
Plasmid-Typ - High-Copy, Low-Copy, Cosmid-DNA
Verarbeitungsmodus - Manuell, Zentrifugation
Durchsatz - 1 - 24
DNA-Bindungstechnologie - Silica-Mini-Spin-Säule
Lysat-Reinigungsmethode - Zentrifugation
Verarbeitungszeit - <30 Minuten
Ausbeute - 15-25 µg bei hoher Kopienzahl; 0,1-5 µg bei niedriger Kopienzahl
Sonstiges - Einschließlich Endotoxin-Entfernungsschritt
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