Isolierung von Plasmid-DNA mit niedrigem Endotoxingehalt (<1EU/µg) aus bis zu 200 ml Bakterienkulturen unter Verwendung von Spin-Maxi-Säulen
Übersicht
Das E.Z.N.A.® Endo-Free Plasmid Maxi Kit bietet eine effiziente Methode für die Isolierung von Plasmid-DNA mit niedrigem Endotoxingehalt in großem Maßstab. Das System verwendet Lysat-Clearance-Filterspritzen anstelle einer Zentrifugation, um bakterielle Lysate nach der alkalischen Lyse schnell zu reinigen. Nach der Lysatreinigung werden die Endotoxine entfernt, und das Protokoll folgt einem einfachen "Bind-Wash-Elute"-Verfahren, um hochwertige Plasmid-DNA zu liefern. Die Ausbeuten variieren je nach Plasmid-Kopienzahl, E. coli-Stamm und Wachstumsbedingungen. 50-200 mL Bakterienkulturen in LB-Medium ergeben in der Regel 0,6-1,2 mg Plasmid-DNA mit hoher Kopienzahl. Bei der Arbeit mit Plasmiden mit niedriger Kopienzahl können bis zu 500 ml Kultur verarbeitet werden. Das System verwendet Zentrifugations- oder Vakuumtechnologie für die Plasmidreinigung und eliminiert die zeitaufwändigen Gravity-Flow-Säulen, die eine Alkoholpräzipitation erfordern. Die gereinigte Plasmid-DNA eignet sich für empfindliche Downstream-Anwendungen wie Transfektion von Säugetierzellen, Klonierung, automatisierte fluoreszierende DNA-Sequenzierung (typische Reads über 800 bp), Sequenzierung der nächsten Generation, Restriktionsenzymverdau, Ligation, PCR, In-vitro-Transkription, Transformation usw.
Schnell - Aufreinigung von Plasmid-DNA in < 45 Minuten
Sicher - Keine Phenol/Chloroform-Extraktionen
Vielseitig - Spin- und Vakuumformate verfügbar
Hochwertig - Plasmid-DNA in Transfektionsqualität und mit niedrigem Endotoxingehalt (< 1 EU/µg)
Spezifikationen
Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren geeignet.
MERKMALE - SPEZIFIKATIONEN
Nachgeschaltete Anwendung - Transfektion, Gentherapie, Klonen, in vitro Transkription, Next-Generation
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