Reagenzkit / als Lösung Ext-RNA

für ForschungszweckeGene

Die ERCC-RNA-Spike-in-Kontrollmischungen wurden vom National Institute of Standards and Technology (NIST) entwickelt und bestehen aus einer Reihe von RNA-Sequenzen mit bestimmten Konzentrationen. Daraus können Standardkurven abgeleitet werden, die die Anzahl der gelesenen Daten mit der RNA-Konzentration in Beziehung setzen, was bei der Leistungsbewertung von Genexpressionsexperimenten weit verbreitet ist. Das Ext-RNA Control Panel v1.0 hat 24 von 92 ERCC-Transkripten mit einer Länge von 273-2.022 bp und einer Konzentration von 0,014305 attomol/μL bis 937,5 attomol/μL erfasst. Die 24 ERCC-RNAs werden als externe Kontrollen für die Quantifizierung der RNA-Expression dienen. Können RNA-Proben direkt für die Bibliotheksvorbereitung mit diesem Kit verwendet werden? Nein. Dieses Kit ist nur mit gDNA oder cDNA als Ausgangsproben kompatibel. Für RNA-Proben ist eine reverse Transkription zur Erzeugung von cDNA vor der Bibliotheksvorbereitung erforderlich. Was ist der empfohlene Eingabebereich? Wie behandelt man Inputs, die diesen Bereich überschreiten? Dieses Kit unterstützt 50-2.000 ng gDNA oder cDNA. Wenn die Eingangsmenge 2.000 ng überschreitet, teilen Sie die Probe in mehrere Reaktionen auf, um die Amplifikationseffizienz zu erhalten. Wie groß ist die Insertgröße dieses Kits? Wie wähle ich die Sequenzierlänge aus? Der Hauptpeak der PCR-Produkte bei Verwendung dieses Kits beträgt ~270 bp. Die PE150-Sequenzierung wird für eine hochwertige Abdeckung empfohlen. Welches ist das empfohlene Sequenzierdatenvolumen für die Analyse des IGTR-Immunrepertoires? Ein Minimum von 0,3 Gb wird empfohlen, um Klone mit einer Abundanz von 0,01 % bei einem Input von 200 ng zu erkennen. Erhöhen Sie das Datenvolumen, um die Empfindlichkeit für Klone mit geringer Häufigkeit zu verbessern. Ist dieses Kit für die Überwachung der minimalen Resterkrankung (MRD) geeignet? Ja. Dieses Kit enthält einen IG-Primer-Mix und einen TR-Primer-Mix mit genspezifischen Primern in separaten Röhrchen,