Reagenzkit zur Amplifikation von DNA Ampli1 WGA PLUS

DNA-PolymeraseTaq-PolymeraseNGS

Der Ampli1 WGA PLUS Kit wurde für eine ausgewogene und vollständige Amplifikation des gesamten DNA-Gehalts einer einzelnen menschlichen Zelle entwickelt und optimiert. Die Eingangs-DNA (von einer einzelnen Zelle und bis zu 1000 Zellen in ~1 μI PBS) kann von frischen/lebenden und/oder fixierten Zellen (PFA2%, CellSave, CellRescue-Röhrchen) stammen. Das Kit kann auch zur Amplifikation von bis zu 10 ng genomischer DNA (z. B. aus Gewebe- oder FFPE-Proben) verwendet werden. Nach der Zelllyse wird die DNA mit einem Restriktionsenzym verdaut und Adaptoren werden an die DNA-Fragmente ligiert. Dadurch wird sichergestellt, dass für jeden beliebigen Locus im Genom die entsprechenden Allele als genomische Fragmente mit gleicher Länge und nahezu identischem GC-Gehalt amplifiziert werden, wodurch der allelische Drop-out aufgrund der unterschiedlichen Amplifikationseffizienz der ursprünglichen DNA-Moleküle drastisch reduziert wird. Die Amplifikation, die im selben Röhrchen durchgeführt wird, erfolgt mit einem einzigen hochspezifischen universellen PCR-Primer für alle Fragmente und unter Verwendung einer DNA-Polymerase mit 3'→5'-Exonuklease-Korrekturleseaktivität, die eine 6,5-fach höhere Zuverlässigkeit als die Standard-Taq-DNA-Polymerase aufweist. Das Ergebnis des Ampli1-WGA-Protokolls ist eine ausgewogene Bibliothek mit Fragmenten von etwa 0,2-2 kb, die das gesamte Genom repräsentieren. Viele verschiedene Arten von Downstream-Analyseverfahren sind mit dem Ampli1 WGA PLUS-Produkt kompatibel, z. B. Variantennachweis durch Sanger oder Next Generation Sequencing (NGS), Mikrosatelliten- oder andere PCR-basierte Genotypisierungsanalysen, Metaphasen-CGH, Array-CGH und genomweite Kopienzahlanalysen durch NGS. Zwei spezielle Downstream-Kits, Ampli1 OncoSeek Panel und Ampli1 LowPass Kit für Illumina,