Dieses Verfahren basiert auf einer verbesserten enzymatischen Methode, die ursprünglich zur Bestimmung von Kreatinin in Serum und Urin entwickelt wurde. Der Test wird in zwei Schritten durchgeführt. Im ersten Schritt wird Kreatin in den ersten Minuten der Vorinkubation der Probe mit Kreatinase entfernt. Im zweiten Schritt wird durch die Zugabe von Kreatininase, die auch als Reaktionsstarter fungiert, das Kreatinin der Probe in Gegenwart von Sarcosinoxidase (Sar OD) unter Bildung von Wasserstoffperoxid hydrolysiert.
Kreatinin + H2O Kreatin
Sarcosin + H2O + O2 H2O2 + Glicin + HCHO
Das bei der Oxidase-Reaktion entstehende Wasserstoffperoxid wird durch eine Reaktion vom Typ Trinder nachgewiesen, bei der das chromogene Derivat HTIB und 4-Aminoantipyrin (4-AA) in Gegenwart von Peroxidase (POD) zu einem roten Chinonimin-Farbstoff kondensiert werden.
4-AA + HTIB Rotes Chinonimin + H2O
Die Geschwindigkeit der Farbentwicklung ist proportional zur Konzentration von Kreatinin in der Probe.
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