Die Kreatinkinase (CK) katalysiert die Reaktion zwischen Kreatinphosphat (CP) und Adenosin-5'-diphosphat (ADP) unter Bildung von Kreatin und Adenosin-5'-triphosphat (ATP). Letzteres phosphoryliert Glucose in Gegenwart von Hexochinase (HK) zu Glucose-6-phosphat (G6P). G6P wird in Gegenwart von reduziertem Nikotinamid-Adenin-Dinukleotid-Phosphat (NADP) in einer von der Glucose-6-Phosphat-Dehydrogenase (G6P-DH) katalysierten Reaktion zu Gluconat-6P oxidiert.
Die Umwandlung wird kinetisch bei 340 nm überwacht, und zwar durch den Anstieg der Absorptionsrate, der sich aus der Reduktion von NADP zu NADPH ergibt und proportional zur Aktivität der in der Probe vorhandenen CK ist.
Bei diesem Test ermöglicht die Anwesenheit von N-Acetilcystein (NAC) die optimale Aktivierung des Enzyms.
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