Direktes Bilirubin (konjugiert) reagiert mit dem Diazoniumsalz 2,4-Dichlorphenyldiazonium (2,4-DPD) in Gegenwart von Sulfaminsäure unter Bildung von Azo-Bilirubin; dieser farbige Komplex kann photometrisch bei 546 nm gemessen werden. Von den beiden Bilirubinfraktionen im Serum - Bilirubin-Glucuronid (konjugiert) und freies Bilirubin, das an Albumin gebunden ist (unkonjugiert) - reagiert nur das erste direkt, während das freie Bilirubin reagiert, nachdem es durch einen Beschleuniger vom Protein (Albumin) verdrängt wurde. Die Differenz zwischen den beiden Messungen: Gesamtbilirubin (mit Beschleuniger) und direktes Bilirubin (ohne Beschleuniger) ermöglicht die Berechnung des indirekten Bilirubins. Die Begriffe "direktes" und "indirektes" Bilirubin beziehen sich ausschließlich auf die Reaktionscharakteristiken in Anwesenheit oder Abwesenheit eines Beschleunigers oder Lösungsvermittlers und sind nur ungefähre Äquivalente der beiden Bilirubinfraktionen.
---