Das virellaSARS-CoV-2 mutant real time RT-PCR Kit ist ein Test zur gleichzeitigen Differenzierung der neuen Coronavirus (SARS-CoV-2) Linien B.1.1.7 (Vereinigtes Königreich, UK), B.1.351 (Südafrika, ZA) und P.1 (Brasilia, BRA) aus biologischen Proben.
2 Prinzip des Tests
Das virellaSARS-CoV-2 Mutant Real-Time RT-PCR Kit enthält vier spezifische Primer- und Sondensysteme für den Nachweis von SARS-CoV-2 Spike-Protein-Mutationen. Jede Mutation ist mit einem spezifischen Farbstoff verbunden. Liegt eine der Mutationen vor, zeigt der spezifische Kanal kein oder ein verzögertes Signal. Die mit diesem Assay erfassten Mutationen sind del69/70 (FAM), del 241-243 (ROX), N501Y (HEX) und H655Y (Cy5). Im Falle von B.1.1.7 (UK), B.1.351 (ZA) oder P.1 (BRA) zeigen der HEX-Kanal und ein weiterer Kanal, je nach Mutation, kein oder ein verzögertes Signal (Tabelle 7). In diesem Fall sollten die beiden anderen Kanäle ein normales Signal zeigen.
4 Vom Benutzer bereitzustellende Geräte und Reagenzien
- Sterile Mikroröhrchen
- Pipetten (einstellbares Volumen)
- Sterile Pipettenspitzen mit Filter
- Tischzentrifuge
- Vortexer
- Echtzeit-PCR-Gerät
- Optische PCR-Reaktionsgefäße mit Deckel oder optische PCR-Reaktionsplatte mit optischer Folie
- Optional: Liquid-Handling-System für die Automatisierung
7 Probenmaterial
Ausgangsmaterial für das virellaSARS-CoV-2 mutant real time RT-PCR Kit ist RNA, die durch real time RT-PCR als positiv für SARS-CoV-2 qualifiziert wurde. Eluate mit sehr niedrigen Kopienzahlen, die zu CT-Werten >32 führen, sind für den Test mit dem virellaSARS-CoV-2 mutant real time RT-PCR Kit nicht geeignet.
8 Probenvorbereitung
Die eluierte RNA muss 1:10 in Verdünnungspuffer verdünnt werden, um die Bedingungen für den Mutationsnachweis zu optimieren.
---