Enzyme-Reagenz A018 series

UDG-Enzymfür RT-qPCRBakterien

Das thermogene UDG-Enzym (Uracil-DNA-Glykosylase) wurde untersucht und aus im Labor gezüchteten Bakterien extrahiert und gereinigt. Ähnlich wie UNG aus E. coli hydrolysiert es Uracil-Glykosid-Bindungen in einzel- oder doppelsträngiger DNA, schneidet Uracil ab und erzeugt alkaliempfindliche, basenlose Stellen in der DNA. Diese basenlosen Stellen können durch Nukleinsäure-Endonuklease, Erhitzung oder Alkalibehandlung hydrolysiert werden, und im Gegensatz zu UNG aus E. coli weist das Enzym eine geringe thermische Stabilität auf, so dass es eher inaktiviert werden kann. Je nachdem, wie die DNA präpariert wird, können UDG-Enzyme für die übliche ortsspezifische oder strangspezifische U-DNA-Spaltung verwendet werden. Definition der Einheit Eine Einheit ist definiert als die Menge an Uracil-DNA-Glycosylase, die erforderlich ist, um 1 μg gereinigte einzelsträngige Uracil-DNA (M13) innerhalb von 60 Minuten bei 37°C vollständig abzubauen.【Produkteigenschaften】 U-DNA-Stellen auf einzel- und doppelsträngiger DNA können hydrolysiert werden, Uracil-Glykosidbindungen können ausgeschnitten werden und alkaliempfindliche basenfreie Stellen können in der DNA erzeugt werden. ♦ Es ist sowohl für einzel- als auch für doppelsträngige DNA aktiv. ♦ Inaktiv für RNA und DNA, die von Natur aus frei von Uracil ist. ♦ Es besteht kein Bedarf an Metallionen und ist in Gegenwart von EDTA voll aktiv. Die Restaktivität in Systemen mit mehr als 100 mM K+ oder Na+ beträgt jedoch etwa 70 % der ursprünglichen Aktivität, so dass ein erhöhter Einsatz erforderlich ist. ♦ Die optimale Reaktionstemperatur ist 37 °C, aber es hat eine bessere Aktivität in einem weiten Bereich von 20-50 °C, und 95 °C kann vollständig inaktiviert werden bei 2 Minuten. ♦ Die empfohlene Menge der Verwendung in PCR ist 0,2U-1U/25μl, und die empfohlene Menge der Verwendung in einem Schritt RT-qPCR und 55-65°C ist nicht mehr als 0,2U/25 μl,