Um relevante, genaue und zuverlässige qPCR-Ergebnisse zu erhalten, sollten Sie immer sorgfältig ausgewählte Kontrollen in Ihr qPCR-Experiment aufnehmen!
> NTCs (No Template Controls)
> Keine RT-Enzymkontrollen in qRT-PCR-Experimenten
> Endogene Kontrollen, die im Rahmen von Genexpressionsstudien im Versuchsprotokoll stabil sind (Housekeeping-Kontrollen)
> Positivkontrollen für diagnostische PCRs. Siehe unsere IPC (RT-IPCY-xxxx) & SPC (RT-SPCY-xxxx) Kontrollen.
Universelle exogene qPCR-Positivkontrolle zur qualitativen Validierung (IPC & SPC):
Real-Time PCR-Assays sind anfällig für Hemmungen durch verschiedene Substanzen, die in vielen Proben vorkommen (klinisch, Boden, Pflanzen...). Auch die Verschleppung von Reagenzien, die für die Isolierung von Nukleinsäuren verwendet werden, kann die Amplifikationsreaktionen hemmen. Andere Ursachen für falsch-negative Ergebnisse sind der Abbau der Zielnukleinsäure, Fehler bei der Probenverarbeitung und Fehlfunktionen des Thermocyclers. Die universelle exogene qPCR-Positivkontrolle von Eurogentec bietet eine genaue Möglichkeit zur Bewertung der Integrität aller Schritte in einem Nukleinsäure-Amplifikationstest:
> Echte Target-Negative von falschen Negativen zu unterscheiden
> den Verlust oder Abbau Ihres Targets während der Extraktion zu überwachen
> die Qualität Ihrer Nukleinsäureextrakte zu beurteilen
Kontrollen auf der Basis von Referenzgenen zur quantitativen Normalisierung (Haushaltskontrollen):
Unsere qPCR Housekeeping-Kontrollkits decken den gesamten relativen Expressionsbereich ab, von niedrigen bis zu sehr hohen Expressionsniveaus. Jedes Set wurde funktionell validiert und auf eine PCR-Effizienz von 95-100 % optimiert, wenn es mit Eurogentec qPCR MasterMixen und Core Kits kombiniert wird.
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