Der LAL-Test basiert auf der Tatsache, dass gramnegatives bakterielles Endotoxin die Aktivierung eines Proenzyms katalysiert. Die anfängliche Aktivierungsrate wird durch die Konzentration des vorhandenen Endotoxins bestimmt. Das aktivierte Enzym (Koagulase) hydrolysiert spezifische Bindungen innerhalb eines Gerinnungsproteins (Koagulogen), das auch in der LAL vorhanden ist. Nach der Hydrolyse assoziiert das entstandene Koagulin selbst und bildet ein gallertartiges Gerinnsel. Die Verwendung von LAL zum Nachweis von Endotoxin geht auf die Beobachtung zurück, dass eine gramnegative Infektion von Limulus polyphemus zu einer tödlichen intravaskulären Gerinnung führte.
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