Onkologie-Testkit EG-90068-NGS

für Magen-Darm-KrankheitenGeneBlut

EliGene® NGS-Kits ermöglichen die Multiplex-PCR-Amplifikation aller erforderlichen Zielregionen des/der interessierenden Gens/Gene. Die empfohlene DNA-Menge für jede Multiplex-PCR-Reaktion liegt zwischen 20 und 100 ng DNA aus formalinfixiertem, in Paraffin eingebettetem (FFPE) Material oder aus Blut. Anschließend werden die resultierenden Amplikons mit MID-Sequenzen barcodiert und pro Probe gemischt. Diese Probe wird quantifiziert und mit einem NGS-Instrument von Illumina für die massiv parallele Sequenzierung (MPS) gemäß den Anweisungen des Herstellers sequenziert. Die sich daraus ergebenden Sequenzlesungen werden anschließend durch Vergleich mit der Referenzsequenz des/der Zielgene(s) analysiert, um Variantenpositionen zu identifizieren. Einführung EliGene® NGS-Kits werden für eine oder mehrere Multiplex-PCR-Reaktionen verwendet, die zur Amplifikation von Zielregionen einer Probe führen. Für die Amplifikation wird ein gebrauchsfertiger Mastermix verwendet, der eine Hot-Start-DNA-Polymerase enthält. Die resultierenden Amplikons jedes Multiplexes werden 100-fach verdünnt. Im zweiten Schritt wird eine zweite PCR-Runde unter Verwendung des EliGene® Adaptor-IL NGS-Kits durchgeführt, was die Markierung aller Amplikons ermöglicht, um MIDs und p7- und p5-Adaptoren einzubauen, die für die Illumina MiSeq-Sequenzierung erforderlich sind. Die resultierenden getaggten Amplikons werden nach einem vordefinierten Assay-spezifischen Mischschema individuell gemischt. Jede Amplikonbibliothek wird anschließend von kleinen Rest-DNA-Fragmenten, die kürzer als 150 bp sind, gereinigt, und die DNA-Konzentration wird mithilfe einer Real-Time-PCR mit Konzentrationsstandards bestimmt.