Der DRG C5a ELISA Kit ist ein Festphasen-Enzymimmunoassay (ELISA), der auf dem Sandwich-Prinzip basiert.
Aufgrund der Kreuzreaktivität der monoklonalen Antikörper mit dem Komplementfaktor C5 wird C5 in der Probe vor der Analyse durch Ausfällung entfernt. Der resultierende klare Überstand enthält das zu bestimmende C5a (10,11). Während der ersten Inkubation bindet das C5a in der Probe an monoklonale murine Anti-C5a-Antikörper (mab 561), die an die Oberfläche der Mikrotiterplatte gebunden sind. Ungebundene Bestandteile werden dann durch Waschen entfernt, und in einer zweiten Reaktion werden Peroxidase-konjugierte monoklonale Antikörper (Mab 557) zugegeben, die an ein anderes Epitop auf C5a binden. Die überschüssigen enzymkonjugierten Antikörper werden durch Waschen entfernt; anschließend wird die Aktivität des gebundenen Enzyms bestimmt. Die enzymatische Reaktion zwischen Wasserstoffperoxid und Chromogen wird durch Zugabe von verdünnter Schwefelsäure abgebrochen.
Die Intensität der Farbintensität, die proportional zur Konzentration von C5a ist, wird photometrisch bestimmt.
Ein Enzym-Immunoassay zur quantitativen Messung von Anaphylatoxin C5a in menschlichem Plasma oder Urin. Das Komplementsystem besteht aus mehr als 20 Proteinen, die sich als Abwehrsystem gegen eindringende Mikroorganismen entwickelt haben. Es kann auch bei einer Vielzahl von Krankheiten oder bei Kontakt mit medizinischen Geräten oder Medikamenten aktiviert werden (1). Bei der Aktivierung setzt eine Kaskade von proteolytischen Enzymen die Anaphylatoxine C3a, C4a und C5a aus ihren jeweiligen Vorstufen frei (2). Diese Fragmente üben verschiedene biologische Funktionen aus, wie die Freisetzung von Histamin, die Kontraktion der glatten Muskulatur, die Erhöhung der Kapillardurchlässigkeit oder die Immunmodulation (3).
---