Der Muse® Autophagy LC3-Antikörper-Kit bietet eine quantitative Lösung für die Untersuchung der Autophagie. Dieses Kit enthält zwei wichtige Detektionsreagenzien, die die Überwachung von lipidiertem LC3-II in einem bestimmten Zellsystem erleichtern und folgendermaßen funktionieren:
Einsatz einer selektiven Permeabilisierungslösung zur Unterscheidung von zytosolischem LC3 und autophagischem LC3 durch Extraktion der löslichen zytosolischen Proteine bei gleichzeitigem Schutz von LC3, das in das Autophagosom sequestriert worden ist
Verwendung eines Autophagie-Detektionsreagens (Autophagie-Reagens A) zur Verhinderung des lysosomalen Abbaus von LC3, wodurch dessen Quantifizierung mittels Durchflusszytometrie ermöglicht wird
Der Muse Autophagy LC3-Antikörper-Kit enthält einen monoklonalen Anti-LC3-Maus-Antikörper, der mit Alexa Fluor® 555 konjugiert ist, um die LC3-Konzentration in der Zelle zu messen und zu verfolgen. Der mit Alexa Fluor® 555 konjugierte Anti-LC3-Antikörper und die Reagenzien zur Aktivierung der Autophagie wurden sorgfältig evaluiert, um eine optimale Leistung zu gewährleisten, so dass eine zusätzliche Validierung der Kit-Reagenzien nicht erforderlich ist. Zusätzlich zu den Reagenzien A und B enthält dieser Kit einen Assay-Puffer, um Forschern eine Komplettlösung für die Autophagie-Analyse zu bieten. Die Reagenzien für die Autophagie-Detektion und der Antikörper wurden gemeinsam optimiert, um eine zuverlässige Methode zur Messung und Unterscheidung zwischen zytosolischem und lipidiertem LC3 zu bieten, die genaue Messungen des autophagischen Prozesses ermöglicht. Die mit dem Guava® Muse® Zellanalysegerät und dem entsprechenden Muse-Softwaremodul erzeugten Daten liefern statistische Werte, die gemessen werden:
Mittlerer Autophagie-Wert (sowohl für Kontroll- als auch für Testproben)
Autophagie-Induktionsverhältnis (Fluoreszenz der Testprobe im Verhältnis zur Kontrolle)
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