Antikörper TurboGFP-Trap

Biochemiefür zellulare BildgebungProtein

Fluoreszierende Fusionsproteine sind ein beliebtes Mittel zur Untersuchung der Proteinlokalisierung und der zellulären Dynamik. Diese Konstrukte fusionieren in der Regel die Gesamtheit - oder zumindest eine funktionelle Domäne - eines Zielproteins mit einem der vielen Arten von fluoreszierenden Reporterproteinen. Das dimere grün fluoreszierende Protein TurboGFP ist vom grün fluoreszierenden Protein CopGFP des Copepoden Pontellina plumata abgeleitet (Shagin et al., 2004). Es besitzt eine hellgrüne Fluoreszenz mit einem Anregungsmaximum bei 482 nm und einem Emissionsmaximum bei 502 nm. TurboGFP ist ein schnell reifendes Protein - sein Fluoreszenzsignal ist in einer Zelle früher sichtbar als das anderer grün fluoreszierender Proteine. TurboGFP weist nur etwa 20 % Sequenzidentität mit GFP-Varianten von Quallen auf. Daher binden die meisten Anti-GFP-Antikörper nicht an TurboGFP - einschließlich unseres GFP-Nanobody, der in GFP-Trap verwendet wird. Es ist einfach, Zellen mit einem TurboGFP-Fusionsproteinkonstrukt abzubilden. Um jedoch ein vollständiges Bild zu erhalten, werden solche Bildgebungsdaten oft mit zusätzlichen biochemischen Informationen über das Protein (oder die Proteindomäne) von Interesse kombiniert. Für solche biochemischen Experimente wird in der Regel ein zweites Fusionsprotein mit einer anderen "Tag"-Domäne entwickelt, die eine Aufreinigung ermöglicht. Diese zusätzlichen In-vitro-Analysen können verwendet werden, um die Funktionalität des "markierten" Fusionskonstrukts zu bestätigen und um Multiproteinkomplexe, die sich im zellulären Milieu bilden können, herauszufiltern. Der Mangel an spezifischen, zuverlässigen und effizienten Reagenzien hat die Verwendung von GFP und verwandten fluoreszierenden Fusionsproteinen sowohl für zellbiologische Studien als auch für direkte biochemische Analysen eingeschränkt.