Reagenzkit zur Vorbereitung von ADN-Banken 3010 series

EnzymePufferlösungBisulfatkonvertierung

Bisulfit-Seq ist eine bekannte Technologie zum Nachweis von DNA-Methylierung, und verschiedene Technologien wie WGBS, RRBS, MeDIP-Seq und MSBS werden für die DNA-Methylierungsanalyse des gesamten Genoms eingesetzt. DNA-Methylierung ist wichtig für die Regulierung von Zellentwicklung, Differenzierung und Genexpression in der Molekularbiologie, Genetik und Epigenetik. Die meisten methylierten Cytosine befinden sich an CpG-Stellen, und 70-80 % der Cytosine sind methyliert. Die Zahl der CpG-Stellen im menschlichen Genom beträgt etwa 28 Millionen, was weniger als 1 % des Genoms ausmacht, während 4,4 % erwartet werden. Die Ganzgenom-Bisulfit-Sequenzierung (WGBS) ist die effektivste Methode der DNA-Methylierungsanalyse. Die einzige Einschränkung ist, dass die Sequenzierungskosten sehr hoch sind, da das gesamte Genom einschließlich aller nicht methylierten Regionen sequenziert wird. Bei der Bisulfit-Sequenzierung mit reduzierter Repräsentation (Reduced Representation Bisulfite Sequencing, RRBS) wird ein kleinerer Teil der methylierten CpG-Stellen sequenziert. RRBS kombiniert Restriktionsenzymverdau und Bisulfit-Sequenzierung und reichert die Sequenzierung für methylierte CpG-Stellen an. Es handelt sich um eine effiziente Technologie zur Schätzung der Methylierungsmuster des gesamten Genoms auf der Ebene der einzelnen Basen. Obwohl dies eine höhere Abdeckungstiefe ermöglicht und die Sequenzierungskosten senkt, liegt die Einschränkung darin, dass nur 10 % der methylierten CpG-Stellen abgedeckt werden. Methylated DNA Immunoprecipitation Sequencing (MeDIP-Seq) ist eine weitere Technik zur Anreicherung des gesamten Genoms, die für die Auswahl methylierter DNA verwendet wird. Unter Verwendung von Antikörpern gegen 5-Methylcytosin wird methylierte DNA aus der gesamten genomischen DNA durch Immunpräzipitation angereichert. die 5-Methylcytosin-Antikörper werden mit fragmentierter genomischer DNA inkubiert und ausgefällt, anschließend wird die DNA gereinigt und sequenziert.