DNA-Polymerase-Reagenz Titan HotTaq

für Forschungszweckefür PCR

Titan HotTaq DNA Polymerase (Abb. 1) ist eine modifizierte Titan Taq DNA Polymerase. Bei Raumtemperatur ist sie inaktiv und hat keine Polymeraseaktivität. Titan HotTaq DNA Polymerase wird durch eine 15-minütige Inkubation bei 95-97°C aktiviert und verhindert die Verlängerung von unspezifisch annealisierten Primern und Primer-Dimeren, die bei niedrigen Temperaturen während des PCR-Setups gebildet werden. Das Enzym hat eine 5'-nach-3'-Polymerisations-abhängige Exonuklease-Ersatzaktivität, aber keine 3'-nach-5'-Exonuklease-Aktivität. Das Enzym hat eine "Extendase-Aktivität", die TA-Klonierung ermöglicht. Konzentration: 5 Einheiten/µl Definition der Einheiten: Eine Einheit ist definiert als die Menge an Enzym, die erforderlich ist, um den Einbau von 10 nmol dNTP in eine säureunlösliche Form in 30 min bei 74°C zu katalysieren. Quelle: Gereinigt aus einem E. coli Stamm, der ein überproduzierendes Plasmid trägt, das ein modifiziertes Gen von Thermus aquaticus DNA Polymerase enthält. Qualitätskontrolle: Das Enzym ist frei von Nicking- und Priming-Aktivitäten, Exonukleasen und unspezifischen Endonukleasen. SDS/PAGE - 95 kD Bande, >98% rein. Aktivität und Stabilität durch Thermocycling getestet. Die Fehlerrate pro Nukleotid pro Zyklus beträgt ~2,5 x 10-5; die Genauigkeit liegt bei ~4 x 104. Die geschätzte Halbwertszeit bei 95°C beträgt 1,5 Stunden. Lagerung & Verdünnungspuffer: 50% Glycerin (v/v), 20 mM Tris-HCl pH 8,7 bei 25°C, 100 mM KCl, 0,1 mM EDTA und Stabilisatoren. Geliefert mit: 10x Reaktionspuffer 1 (Mg2+, detergenzienfrei) Tris-HCl und (NH4)2SO4 10x Reaktionspuffer 2 (Mg2+ frei) Tris-HCl, (NH4)2SO4 und Detergens 25 mM MgCl2 10x Enhancer - Zusatzstoff, der die Amplifikation schwieriger Vorlagen (z. B. GC-reiche DNA-Vorlagen) erleichtert.