Für die quantitative Bestimmung der Alanin-Aminotransferase im Serum.
METHODIK
Die International Federation of Clinical Chemistry (IFCC) veröffentlichte 1980 eine empfohlene Methode, die den LDH-NADH-gekoppelten Assay verwendet. Das hier beschriebene Verfahren basiert auf dieser Methode.
Prinzip
ALT katalysiert die Übertragung der Aminogruppe von L-Alanin auf -Ketoglutarat, was zur Bildung von Pyruvat und L-Glutamat führt. Laktatdehydrogenase katalysiert die Reduktion von Pyruvat und die gleichzeitige Oxidation von NADH zu NAD. Die sich daraus ergebende Geschwindigkeit der Absorptionsabnahme ist direkt proportional zur ALT-Aktivität.
REAGENZIENVORBEREITUNG
Arbeitsreagenz durch Mischen von 4 Teilen R1-Reagenz mit 1 Teil R2-Reagenz vorbereiten.
(z. B. 200 µL R1 mit 50 µL R2-Reagenz)
REAGENZIENVERSCHLECHTERUNG
Verwenden Sie das Reagenz nicht, wenn:
1. Die anfängliche Absorption bei 340nm unter 0,8 liegt.
2. Das Reagenz entspricht nicht den angegebenen Leistungsparametern.
VORSICHTSMASSNAHMEN
1. Dieses Reagenzienset ist nur für die In-vitro-Diagnostik bestimmt.
2. Das Reagenz R1 enthält Natriumazid als Konservierungsmittel. Nicht verschlucken.
ENTNAHME UND LAGERUNG DER PROBEN
1. Es wird nicht hämolysiertes Serum empfohlen. Erythrozyten enthalten ALT, was zu falsch erhöhten Ergebnissen führen kann.
2. ALT im Serum ist bei Raumtemperatur (15-30 °C) drei Tage lang stabil, bei 4 °C eine Woche.
VORGEHEN
Wellenlänge: 340 nm
Assay-Typ : Kinetisch
Reaktionsrichtung : Abnehmend
Temperatur: 37°C
Sichtweite : 1 cm
1. Auf Raumtemperatur bringen ( 15 -30 °C)
2. Das Photometer mit destilliertem Wasser auf 0 (Null) stellen
3. Mischen und bei 37 °C bebrüten
4. Nach 60 Sek. die Absorption ablesen und aufzeichnen
5. Röhrchen auf 37 °C zurückstellen.
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