Für die quantitative Bestimmung der Aspartat-Aminotransferase (AST) in Humanserum.
METHODIK
Karmen entwickelte 1955 ein kinetisches Testverfahren, das auf der Verwendung von Malatdehydrogenase und NADH beruhte. Optimierte Verfahren wurden 1960 von Henry und 1962 von Amador und Wacker vorgestellt. Diese Änderungen erhöhten die Genauigkeit und verringerten die Wirkung von Störsubstanzen. Die IFCC veröffentlichte 1978 eine empfohlene Methode, die P-5-P einschloss. Die vorliegende Methode basiert auf den IFCC-Empfehlungen, enthält jedoch kein P-5-P, da die meisten Proben ausreichende Mengen dieses Cofaktors für eine vollständige Wiederherstellung der AST-Aktivität enthalten.
Prinzip
Die Aspartat-Aminotransferase (AST) katalysiert die Übertragung der Aminogruppe von Laspartat auf α-Ketoglutarat unter Bildung von Oxalacetat und L-Glutamat. Das Oxalacetat wird bei gleichzeitiger Oxidation von NADH zu NAD in der durch die Malatdehydrogenase (MDH) katalysierten Indikatorreaktion reduziert. Die sich daraus ergebende Geschwindigkeit der Absorptionsabnahme bei 340 nm ist direkt proportional zur AST-Aktivität. Laktatdehydrogenase (LDH) wird hinzugefügt, um Störungen durch endogenes Pyruvat zu verhindern, das normalerweise im Serum vorhanden ist.
REAGENZIENVORBEREITUNG
Arbeitsreagenz durch Mischen von 4 Teilen R1-Reagenz mit 1 Teil R2-Reagenz vorbereiten (z. B. 200 µL R1 mit 50 µL R2-Reagenz)
REAGENZIENVERSCHLECHTERUNG
Verwenden Sie das Reagenz nicht, wenn:
1. Die anfängliche Absorption bei 340nm unter 1,0 liegt.
2. Das Reagenz entspricht nicht den angegebenen Leistungsparametern.
ERFORDERLICHE, ABER NICHT BEREITGESTELLTE MATERIALIEN
1. Präzise Pipettiergeräte.
2. Reagenzgläser/Regal.
3. Zeitschaltuhr.
4. Spektralphotometer, das bei 340 nm messen kann. (UV)
5. Heizbad/Block (37°C).
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