qualitativer Nachweis von 2019er Virus-RNA in Proben des oberen Respirationstrakts
(nasopharyngeale und oropharyngeale Extrakte) durch Echtzeit-PCR-Systeme. Er gilt als Hilfsmittel für die Diagnose der 2019-Virusinfektion.
2. Prinzip der Real-Time RT-PCR
Das Prinzip des Echtzeit-Nachweises basiert auf dem fluorogenen 5'-Nuklease-Assay. Während der PCR-Reaktion wird die DNA-Polymerase
die Sonde am 5'-Ende und trennt den Reporterfarbstoff erst dann vom Quencherfarbstoff, wenn die Sonde an die Ziel-DNA hybridisiert.
Durch diese Spaltung entsteht das Fluoreszenzsignal des gespaltenen Reporterfarbstoffs, das vom PCR-Detektionssystem in Echtzeit überwacht wird. Der PCR-Zyklus, bei dem zunächst ein Anstieg des Fluoreszenzsignals festgestellt wird (Ct), ist proportional zur Menge des spezifischen PCR-Produkts. Die Überwachung der Fluoreszenzintensitäten in Echtzeit ermöglicht den Nachweis des anfallenden Produkts, ohne dass das Reaktionsgefäß nach der Amplifikation erneut geöffnet werden muss.
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