Reagenzkit / als Lösung MOLgen

für Echtzeit-PCRfür KlinikenSNP

Der Reagenzienkit ist für die Bestimmung des Einzelnukleotid-Polymorphismus des MCM6-Gens - 13910C/T durch Real-Time-PCR mit Nachweis von Schmelzkurven bestimmt. Die Kits enthalten nur Reagenzien für die Echtzeit-PCR. Einführung das "MOLgen Genetics MCM6 Kit" ist für die Bestimmung des Einzelnukleotid-Polymorphismus -13910 C/T im MCM6-Gen (regulatorische Stelle des LCT-Gens, das für Laktase kodiert) in klinischen Proben (Vollblut, Wangenepithel) unter Verwendung der Methode der Echtzeit-Polymerase-Kettenreaktion (PCR) mit Schmelzkurvenanalyse bestimmt. Die Extraktion von DNA aus klinischen Proben kann mit dem "MOLgen Universal Extraction Kit" der Firma Adaltis S.r.l. durchgeführt werden. Die Ergebnisse der PCR-Analyse werden bei der komplexen Diagnostik von Krankheiten berücksichtigt. Das Kit ist für die Verwendung mit PCR-Cyclern vom Blocktyp vorgesehen: AMPLIlab (Adaltis), CFX96 (Bio-Rad, USA). Der Kit enthält Reagenzien, die für 48 Tests, einschließlich Kontrollproben, benötigt werden. Prinzip der Methode Das Prinzip der Methode basiert auf der Amplifikation der ausgewählten humanen DNA-Region mit anschließender Bildung von Hybridduplexen aus PCR-Produkt und spezifischer DNA-Sonde und dem Nachweis von Duplex-Schmelzkurven. Der Amplifikationsschritt besteht aus wiederholten Zyklen: Temperaturdenaturierung der DNA-Matrize, Anlagerung der Primer an spezifische Stellen der DNA-Matrize und Primerverlängerung mit Taq-Polymerase. Nach dem Amplifikationsschritt wird die Temperatur gesenkt und die spezifische fluoreszenzmarkierte DNA-Sonde hybridisiert mit dem Quencher-markierten Amplikon, was zu einer Abnahme des Fluoreszenzsignals führt. Während des Schmelzschritts wird die DNA-Sonde freigesetzt, was zu einem Anstieg der Fluoreszenz führt.