das "MOLgen Genetics Interleukin 28B Kit" ist ein Assay-Kit für die Bestimmung von Einzelnukleotid-Polymorphismen des Interleukin 28B-Gens mittels Echtzeit-Polymerase-Kettenreaktion mit Detektion von Schmelzkurven.
Einführung
"MOLgen Genetics Interleukin 28B Kit" ist ein Assay-Kit für die Bestimmung von Einzelnukleotid-Polymorphismen des Interleukin 28B-Gens mittels Real-Time-Polymerase-Kettenreaktion mit Detektion von Schmelzkurven. Der Kit ist für die differenzierte Bestimmung der Einzelnukleotid-Polymorphismen rs12979860 C/T und rs8099917 T/G des Interleukin 28B-Gens (IL28B) mittels Polymerase-Kettenreaktion (PCR) mit Schmelzen der Hybridisierungsprodukte mit einem fluoreszierenden Tag und Analyse der Schmelzkurven bestimmt.
Die Extraktion von DNA aus klinischem Material kann mit dem Kit durchgeführt werden: "MOLgen Universal Extraction Kit".
Der Kit ist für die Verwendung mit dem Echtzeit-PCR-Cycler CFX96 (Bio-Rad, USA) bestimmt.
Das Kit ist für die Untersuchung von 48 Proben, einschließlich Kontrollproben, ausgelegt.
Prinzip der Methode
Das Prinzip der Methode basiert auf der Amplifikation der ausgewählten humanen DNA-Region, gefolgt von der Detektion der Schmelzkurven der Hybridkomplexe in den PCR-Produkten und den spezifischen Sonden. Der Amplifikationsprozess besteht aus wiederholten Zyklen: Temperaturdenaturierung der DNA-Matrix, Annealing von Primern mit komplementären Sequenzen der DNA-Matrix und Synthese einer komplementären Kette aus diesen Primern mit Taq-Polymerase.
Nach der Amplifikationsreaktion führt das Absenken der Temperatur zur Hybridisierung der spezifischen DNA-Sonde mit dem Amplifikationsprodukt und zu einer Abnahme des Fluoreszenzsignals im Röhrchen.
---