"Molgen Genetics Haemostatic Disease (PAI-1/ITGB3) Kit" ist ein Assay-Kit für den Nachweis von Einzelnukleotid-Polymorphismus in den PAI-1- und ITGB3-Genen des Blutgerinnungssystems mittels Echtzeit-PCR mit Nachweis von Schmelzkurven.
Einführung
der "Molgen Genetics Haemostatic Disease (PAI-1/ITGB3) Kit" ist für den Nachweis des Einzelnukleotid-Polymorphismus 5G(-675)4G im PAI-1-Gen (kodiert für Serpin 1, den endothelialen Inhibitor des Plasminogenaktivators) und T1565C im ITGB3-Gen (kodiert für Integrin beta-3, ein Teil des Fibrinogenrezeptors) in klinischen Proben (Vollblut, Wangenepithel) unter Verwendung der Methode der Echtzeit-Polymerase-Kettenreaktion (PCR) mit Schmelzkurvenanalyse.
Die Ergebnisse der Genotypisierung werden bei der komplexen Bewertung des Thrombophilierisikos (Anfälligkeit für erbliche Thrombophilie) berücksichtigt.
Die Extraktion von DNA aus klinischen Proben kann mit dem "Molgen Universal Extraction Kit" durchgeführt werden.
Das Kit ist für die Verwendung mit dem Block-PCR-Cycler CFX96 (Bio-Rad, USA) wie dem Adaltis AmpliLab vorgesehen.
Der Kit enthält Reagenzien, die für 48 Tests, einschließlich Kontrollproben, benötigt werden.
Prinzip der Methode
Das Prinzip der Methode basiert auf der Amplifikation der ausgewählten humanen DNA-Region mit anschließender Bildung von Hybridduplexen aus PCR-Produkt und spezifischer DNA-Sonde und dem Nachweis von Duplex-Schmelzkurven.
Der Amplifikationsschritt besteht aus wiederholten Zyklen: Temperaturdenaturierung der DNA-Matrize, Anlagerung der Primer an spezifische Stellen der DNA-Matrize und Primerverlängerung mit Taq-Polymerase.
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