"Molgen Genetics Haemostatic Disease (ITGA2/FVII) Kit" ist ein Assay-Kit für den Nachweis von Einzelnukleotid-Polymorphismus in den Genen ITGA2 und F7 des Blutgerinnungssystems mittels Echtzeit-PCR mit Detektion von Schmelzkurven.
Einführung
der "Molgen Genetics Haemostatic Disease (ITGA2/FVII) Kit" ist für den Nachweis des Einzelnukleotid-Polymorphismus C807T im ITGA2-Gen (kodiert Integrin alpha-2) und G10976A im F7-Gen (kodiert den Gerinnungsfaktor VII) in klinischen Proben (Vollblut, Wangenepithel) mittels Real-Time-Polymerase-Kettenreaktion (PCR) mit Schmelzkurvenanalyse bestimmt.
Die Ergebnisse der Genotypisierung werden bei der komplexen Bewertung des Thrombophilierisikos (Anfälligkeit für hereditäre Thrombophilie) berücksichtigt.
Die Extraktion von DNA aus klinischen Proben kann mit dem "Molgen Universal Extraction Kit" durchgeführt werden.
Das Kit ist für die Verwendung mit dem Block-PCR-Cycler CFX96 (Bio-Rad, USA) wie dem Adaltis AmpliLab
Der Kit enthält Reagenzien, die für 48 Tests, einschließlich Kontrollproben, benötigt werden.
Prinzip der Methode
Das Prinzip der Methode basiert auf der Amplifikation der ausgewählten humanen DNA-Region mit anschließender Bildung von Hybridduplexen aus PCR-Produkt und spezifischer DNA-Sonde und dem Nachweis von Duplex-Schmelzkurven.
Der Amplifikationsschritt besteht aus wiederholten Zyklen: Temperaturdenaturierung der DNA-Matrize, Anlagerung der Primer an spezifische Stellen der DNA-Matrize und Primerverlängerung mit Taq-Polymerase.
Nach dem Amplifikationsschritt wird die Temperatur gesenkt und die spezifische fluoreszenzmarkierte DNA-Sonde hybridisiert mit dem Quencher-markierten Amplikon, was zu einer Abnahme des Fluoreszenzsignals führt.
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