das "Molgen DNA Mycoplasma genitalium S1 Kit" ist ein Assay-Kit für den Nachweis von Mycoplasma genitalium DNA mittels Real-Time-PCR.
Einführung
der "Molgen DNA Mycoplasma genitalium S1 Kit" ist für den Nachweis von Mycoplasma genitalium DNA in klinischen Proben (Speichel, Urin, Abstriche von Epithelzellen) mittels Real-Time-Polymerase-Kettenreaktion (PCR) mit Fluoreszenzdetektion des amplifizierten Produkts bestimmt.
Der Kit ist für die Verwendung mit Block-PCR-Cyclern validiert: iQ5 iCycler, CFX96 (Bio-Rad, USA), DT-96 (DNA-Technology, Russland).
Die Extraktion der DNA kann mit dem "Molgen Universal Extraction Kit" durchgeführt werden.
Bei Verwendung von NA-Extraktionskits anderer Hersteller wird dringend empfohlen, eine von Adaltis hergestellte interne Kontrollprobe (IC) zu verwenden.
Der Kit enthält Reagenzien, die für 96 Tests, einschließlich Kontrollproben, benötigt werden.
Prinzip der Methode
Die Real-Time-PCR basiert auf dem Nachweis der von einem Reportermolekül erzeugten Fluoreszenz, die im Verlauf der Reaktion zunimmt. Das Reportermolekül ist eine zweifach markierte DNA-Sonde, die sich spezifisch an die Zielregion der Erreger-DNA bindet. Das Fluoreszenzsignal erhöht sich aufgrund der Trennung von Fluoreszenzfarbstoff und Quencher durch die Taq-DNA-Polymerase-Exonukleaseaktivität während der Amplifikation. Die PCR besteht aus wiederholten Zyklen: Temperaturdenaturierung der DNA, Primer-Annealing und Synthese der komplementären Kette.
Der Zyklusschwellenwert (Ct) ist eine Zykluszahl, bei der die in einer Reaktion erzeugte Fluoreszenz den Schwellenwert überschreitet und das Fluoreszenzsignal deutlich über den Hintergrund ansteigt. Das erhöhte Signal ist auf die Verwendung einer DNA-Hybridisierungssonde zurückzuführen, die für die gegebene DNA-Sequenz spezifisch ist
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