Der EIAgen Total T4 Kit ist ein direkter Festphasen-Enzymimmunoassay für die quantitative Bestimmung von Gesamt-Thyroxin (T4) in Humanserum oder -plasma. Die Methode kann zur Messung von T4-Konzentrationen im Bereich von 4 bis 300 ng/mL (0,4 bis 30 µg/dL) verwendet werden.
Einführung
Die Messung der Serumthyroxinkonzentration gilt allgemein als wichtiger diagnostischer In-vitro-Test zur Beurteilung der Schilddrüsenfunktion. Diese Bedeutung hat den Anstoß für die erhebliche Verbesserung der Testmethodik in den letzten drei Jahrzehnten gegeben. Diese verfahrenstechnische Entwicklung lässt sich vom empirischen Test mit proteingebundenem Jod (PBI) (1) bis hin zum theoretisch ausgefeilten Radioimmunoassay (2) nachvollziehen.
Diese Mikroplatten-Enzymimmunoassay-Methode bietet dem Techniker eine optimale Empfindlichkeit und erfordert nur wenige technische Handgriffe.
Prinzip der Methode
Die Serum- oder Plasmaprobe wird in die mit Streptavidin beschichteten Vertiefungen pipettiert. Durch Zugabe des Biotin-T4-Konjugats (Biotin-T4) und des immunologischen Reaktionsstarters Anti-T4-HRP-Konjugat wird der kompetitive Assay eingeleitet. Während der immunologischen Inkubation konkurriert das T4 der Probe mit dem Biotin-T4-Konjugat um die Anti-T4-Bindungsstellen des Anti-T4-HRP-Konjugats, das seinerseits von den mit Streptavidin beschichteten Vertiefungen durch den Biotin-Anteil gebunden wird. Nach dem Abwaschen der nicht reagierenden Spezies bleibt die Menge des immunologischen Komplexes in den Vertiefungen gebunden
Streptavidin : Biotin-T4 : Anti-T4-HRP
wird durch die Inkubation mit dem Chromogen/Substrat nachgewiesen. Die Blaufärbung wird dann mit Schwefelsäure gestoppt,
---