Restriktionsenzym-Verdauung
Definition der Einheiten - Eine Einheit ist definiert als die Enzymmenge, die erforderlich ist, um 1 µg λ-DNA-Fragmente (HindIII-Verdauung) in 1 Stunde bei 37°C in einem Gesamtreaktionsvolumen von 50 µl zu verdauen.
Lagerbedingungen - 10 mM Tris-HCl, 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0,1 mM EDTA, 200 μg/ml BSA, 50% Glycerol, pH 7,4 @ 25°C
Reaktionsbedingungen - 1X Puffer CutS, Inkubation bei 37°C.
Reaktionspuffer oder Mischung - 1X Puffer CutS:
50 mM Kaliumacetat, 20 mM Tris-Acetat, 10 mM Magnesiumacetat, 100 μg/ml BSA, pH 7,9 bei 25°C
Hitze-Inaktivierung - 65°C für 20 Minuten
Methylierungs-Empfindlichkeit -
dam-Methylierung - Nicht empfindlich
dcm-Methylierung - Nicht empfindlich
CpG-Methylierung - Beeinträchtigt
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